PRM可对?标蛋?质、?标肽段(如发?翻译后修饰的肽段)进?选择性检测,从而实现对?标蛋?质/肽段的靶向验证和相对或绝对定量。?于?筛之后的验证实验。
PRM技术是在多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)技术的基础上演化而来的 。 它基于?分辨 、?精度质谱(如Orbitrap系列),?先利?四级杆质量分析器的选择检测能力 ,在 一级质谱中选择性地检测?标肽段的?离?信息; 随后在collision cell中对?离?进?碎裂; 最后利?高分辨 、?质量精度分析器在?级质谱中检测所选择的?离?窗?内的所有碎?的信息。
两者都可?于差异较?的样本(不同物种、不同组织部位),“有无”蛋白比较,不需要同位素标记,成本相对低;样本不受限制,应?范围?;
LFQ确定是数据重复性稍差,缺失值较多;
全息扫描DIA的重现性较高,所有离?信息都能采集,缺点是需要预先建?数据库,数据分析较LFQ复杂。
DIA是全息扫描模式,能全?记录样本信息,定量准确性大大提高,重复性好,缺失值少,样本采集时加?了保留时间校正同位素肽段,适合?样本量,上机时间间隔可以较大,数据可回溯。可?于不同因素影响下的差异蛋?筛选,不同组织蛋?表图谱绘制,疾病分型等等。
DIA技术是相较于传统DDA技术而?的,传统的DDA技术依赖于?级母离子的峰强度,选择信号排名在前?位的另外,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若?个窗口,对每个窗口中的所有离子进?选择、碎裂、检测,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。
虽然DIA定量能力出色,但毕竟是非靶技术,结果最终还需要进?靶向验证。但DIA的?准确性,能够使后续靶向验证的衔接性、?致性更高。从某种程度上来说,DIA实现了筛选与初步验证的合?为?。
DIA定量原理与靶向技术相似,都是采?二级碎片离子进行定量。